[讨论]瘦肉精及其检测仪器设备

ellen · 发表于 2005-11-25 15:27

最近一直在出差，都没有时间来这里看，我老大让我整理关于瘦肉精的检测设备仪器阿什么的，那位朋友能给些建议？

xinxinyu · 发表于 2005-11-25 15:39

参考 GB/T 5009.192--2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定

KC20051717 · 发表于 2005-11-25 21:03

ellen ！！我比较熟悉瘦肉精的检测方法与设备，你给我一个邮箱，我把检测方法与设备仪器与耗材给你发过去。

KC20051717 · 发表于 2005-11-25 21:19

克伦特罗定量ELISA试剂盒
产品编号:101225
测试前请仔细阅读本说明
（试剂盒组分应4°C保存）
说明
本试剂盒用于猪尿样品中克伦特罗定量检测,请注意该试剂盒适用于猪尿中1ppb或5ppb临界值的克伦特罗检测，每种临界值具有必须遵循的特定步骤，此步骤确保得到最适宜结果。如果检测饲料或组织样品,请与Neogen代表联系以获得合适的样品提取步骤.
测试原理
本试剂盒是以样品中的克伦特罗与酶结合物中克伦特罗竞争抗体包被板上有限抗体位点为基础。
提供的材料
1.EIA 缓冲液: 40ml，用于浓缩酶结合物稀释；
2.样品缓冲液：25ml,用于样品稀释(1ppb检测)；
3.浓缩洗涤缓冲液(10倍稀释): 25ml；使用之前用去离子水或超纯水做10倍稀释。稀释的洗涤缓冲液用于洗去孵育后微孔板中未结合的酶结合物和标准品/样品；
4. K-Blue 底物: 20mL. 稳定的3,3’,5,5，-四甲基对二氨基联苯(TMB)-过氧化氢(H2O2)混合物装于一个瓶子中，用于微孔板显色。冷冻保存底物（光敏感）；
5.1N硫酸：14ml,酸终止试剂（注意：腐蚀性试剂）；
6.浓缩酶结合物（180倍稀释）: 200 ml,浓缩的辣根过氧化物酶结合物，使用前1:180稀释；
7.抗体包被板: 96孔微孔板，每条8孔，用抗克伦特罗抗体包被，直接使用;检测前请勿洗涤；
8.标准品: 200mL，绿盖小瓶，浓度分别为 0，0.05，0.2，0.5，1，2 和6ng/ml(ppb),直接使用，请勿稀释。
未提供的必需品
1.去离子水或超纯水；
2.量程为10mL-1000mL的精确微量移液器及一次性吸头
注意: 若一次使用多个板条，建议使用多通道微量移液器以获得最佳结果。
3.用于稀释和混合洗涤缓冲液的刻度量筒；
4. 孵育时覆盖微孔板的薄膜或微孔板盖；
5.洁净的玻璃器具(如：试管等)，用以稀释酶结合物和样品；
6.450nm酶标仪。
可选材料
微量振荡器
操作注意事项
1.请勿使用过期的试剂盒或其中的组件；
2.请勿把本试剂盒中的任何试剂或组件与其他任何试剂盒中的任何试剂或组件混合。本试剂盒的设计确保按照提供时的状态使用可正确工作。
3.请勿用嘴吸取试剂。
4.始终将K-Blue底物从瓶子倒入洁净的试管或其他容器再使用。为避免底物的污染，请勿直接从瓶子中吸取底物。
5.所有的样品都应该认为有引起感染的可能。按照适当的预防措施进行操作。
6.除在加入试剂、洗涤或读数时，均应盖上微孔板的盖子。
7.不用时，试剂盒的组件应冷藏保存。
8.在打开并从瓶子中移取试剂时，用无菌操作的方法进行。
9.请勿在对样品或试剂进行操作的区域吸烟、吃东西或喝饮料。
步骤说明
1.干燥剂必须与未使用的板条一起留在锡箔袋中。不用时，应保持锡箔袋密封以维持干燥的环境。若封口失败，请用热封口机封口或在其开口端扎紧。封口前应驱除多余空气；
2.对缓冲液、酶结合物、标准品和样品进行操作时，一定要使用不同的洁净吸头;
3.移取一种试剂前，要用该试剂润洗移液器吸头3次(如：吸取所需数量的试剂然后再放回到该试剂瓶，重复，共3次)。这样，吸头就正确地润洗好了，可用他将试剂转移到微孔或试管中;
4.向微孔中加入试剂时，请勿让吸头接触孔的内壁，或其他已经存在于孔中的试剂。这样会导致交叉污染;
5.标准和样品应做平行样;
6.浓缩状态下的酶结合物是最稳定的,只对现用板条所需的试剂量进行稀释;
7.打开盛放酶结合物及对照液的小瓶之前，在竖直方向上轻弹瓶子，以去除留在盖子上的液体;
8.加入底物之前，用吸水纸擦去微孔低部外侧的灰尘或指纹;
9.使用之前，轻轻混合样品和试剂,避免剧烈的搅动;
10. 只使用试剂盒中的一部分试剂时，建议移取合适量的每一种试剂分别到洁净的容器中用于反复的操作，以减低反复从原装容器中取试剂造成的污染。
样品准备
本试剂用于猪尿样品中克伦特罗检测, 如果检测饲料或组织样品,请与Neogen代表联系以获得合适的样品提取步骤.
如果尿样出现混浊或大颗粒物质存在，取样前须离心以除去样品中颗粒物质。 Neogen公司销售技术代表联络人： 136 4532 3321
测试步骤（1ppb）
1. 用去离子水或超纯水10倍稀释洗涤缓冲液（例如：25ml浓缩洗涤缓冲液+225ml去离子水），充分混匀;
2. 决定所需微孔的个数;
3.稀释酶结合物浓缩液：1mL酶结合物中加入180mLEIA 缓冲液(1:180)稀释），充分混合;
注意: 计算用于稀释的酶结合物体积时，由于移取时的损失，应增加几个微孔的量。(如：用单吸头移液器，应增加4个微孔的量，用多通道微量移液器，则增加8个微孔的量)。
适用于临界值为1ppb的标准品是：0,0.05,0.2,0.5,1和2ppb
4.相应孔中加入20mL标准品或样品;
5.每孔加入150μl样品缓冲液（为了提高加液速度可采用8通道或12通道加样器），轻轻震荡微孔板（可采用微孔板震荡器）；
6.用塑料膜或用微孔板盖覆盖好微孔板，于室温下孵育15分钟；
7.标准品或样品孵育完成后,移开板盖,倒掉孔内液体,在干净的吸水纸上拍打微孔板来除去孔中多余液体；
8.每孔用300μl稀释的洗涤缓冲液洗板3次，每次洗涤后倒掉液体并在吸水纸上拍干，也可采用自动微孔洗板机,但洗涤次数应增加为5次；
9.每孔加入已稀释的酶结合物180μl(用8通道或12通道加样器)，轻轻混匀微孔板（也可采用微孔板震荡器）；
10.用塑料膜或微孔板盖覆盖好微孔板，于室温下孵育30分钟（注意：微孔板远离飘浮物且温度勿波动）；
11.酶结合完全后移去盖板，倒掉孔内液体，,在干净的吸水纸上拍打微孔板来除去孔中多余液体；
12.每孔用300μl稀释的洗涤缓冲液洗板3次，每次洗涤后倒掉液体并在干净的吸水纸上拍干，也可采用自动微孔洗板机,但洗涤次数应增加为5次；
13.每孔加入100μl K-Blue底物（为了提高实验结果的准确性，可采用8通道或12通道加样器），轻轻震荡微孔板；
14.用塑料膜或微孔板盖覆盖好微孔板，于室温下孵育15分钟;
15.移掉板盖，每孔加入100μl酸终止液（为提高实验结果的准确性可采用8通道或12通道加样器）；
16.轻轻震荡微孔板，加酸后30分钟内于450nm下读数；
17.绘制标准曲线，计算样品中克伦特罗的浓度（见计算）。

KC20051717 · 发表于 2005-11-25 21:24

克伦特罗检测标准：欧盟 1ppb

1.阳性结果需要进行仪器确认，因为ELISA方法是快速初筛，准确性比仪器差。仪器测定如用GC-MS测定。
2.假阳性结果有出现的可能，原因很多，因具体情况而定。
出现假阳性结果是指用试剂盒测定是阳性结果，用仪器确证是阳性结果，那么就是假阳性。
3.取样按说明书操作即可，一般肉样不取脂肪。
4.结果报告：克伦特罗检测限为1ppb。
阴性样品：<1ppb （不给数值）
阳性样品：给具体测定值。
5.标准曲线的绘制有些酶标仪可完成，有些不能。
一般酶标仪连有电脑，电脑中袋有测试软件，可完成标准曲线的测定和样品的计算。
每次测定都要做标准曲线，某一条标准曲线不可长期使用。

氯霉素的标准：欧盟 0.10ppb
1.用仪器法测定最准确。ELISA试剂盒只做初筛，筛查的阳性样品必须经仪器法确证（用GC-MS确证）。
EURO氯霉素检测下限为0.02ppb 。
2.国内对阳性样品的仪器确证一般用GC-MS（气质联用），可达到欧盟要求的检测下限。如用液相色谱法不能达到检测下限（0.1ppb针对氯霉素而言），液相只能最好达到10ppb。而试剂盒能达到氯霉素0.02ppb。
3.每个样品应做两个平行孔，标准品需用16个孔（两孔平行），
所以一个板条可做40个样品测定：40×2=80孔
80孔+16孔=96孔
5.一般氯霉素和克伦特罗检测时间为一天。
6.克伦特罗：尿样：取样后冷冻保存。
组织：样品可均质后冷冻保存。