【 肝素回收率≥95% 】助力新国家标准的食品中乳铁蛋白测定

王中泰

【 肝素回收率≥95% 】助力新国家标准的食品中乳铁蛋白测定

肝素亲和柱

肝素亲和柱可特异吸附乳铁蛋白。


试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取，再通过肝素亲和柱富集净化后,可以直接用于HPLC分析。

Lubex肝素亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，改善信噪比，提高检测方法的准确度。
柱容量验证牛乳铁蛋白回收率≥95%。


乳铁蛋白（Lactoferrin, Lf）是一种主要存在于哺乳动物乳汁中的糖蛋白，相对分子量约为80KDa。



乳铁蛋白在体内不仅参与铁的转运，还具有抗菌、抗病毒、抗氧化和免疫调节的功能。

乳铁蛋白被认为是一种新型的抗菌、抗癌药物和具有开发潜力的食品和饲料添加剂，目前已被广泛添加于婴幼儿食品中。




2021年发布的《食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定》（征求意见稿）中，对肝素亲和柱的柱容量验证方法提出了大于80%回收率的要求。

而即将实施的GB 5009.299-2024《食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》则进一步提高了回收率标准，要求牛乳铁蛋白回收率达到至少95%，并且每批次样品至少测试两根肝素亲和柱进行验证。




市场上主流品牌如G家应用于旧国标的肝素亲和柱回收率在92%~96%之间，略低于新标准的要求。

为了符合最新标准，Lubex推出了专为样品前处理设计的肝素亲和柱。
本研究采用了符合国家标准的方法进行验证，结果显示回收率接近100%，完全符合新标准的要求。

Lubex 肝素亲和柱

一、试剂配制
磷酸盐缓冲液Ⅰ：
称取7.1 g磷酸氢二钠、58.4 g氯化钠，加900 mL水溶解，用磷酸调pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，临用现配。

磷酸盐缓冲液Ⅱ：
称取28.4 g磷酸氢二钠，加900 mL水溶解，用磷酸调节pH至7.5±0.2，加水定容至1000 mL，临用现配。

0.1%三氟乙酸溶液：
量取1 mL三氟乙酸注入900 mL水中，用水稀释至1000 mL，过0.45 μm滤膜。

二、样品处理

牛乳铁蛋白标准储备溶液(5.0mg/mL)：
称取50mg(精确至0.1mg)牛乳铁蛋白标准品用水溶解,转移至10mL容量瓶并定容至刻度,混匀,0℃~4℃条件下保存,可保存3个月。

三、操作程序

活化：
取出Lubex肝素免疫亲和柱， 肝素亲和柱先用5mL磷酸缓冲液Ⅱ活化，准确移取10ml上清液过柱；

用10ml磷酸缓冲液Ⅱ淋洗，弃去流出液，用5mL磷酸缓冲液Ⅰ洗脱，收集洗脱液并用磷酸缓冲液Ⅰ定容至5mL，涡旋混匀，过0.45µm水相针式滤器后待测。

四、操作条件

1)色谱柱: ECOSIL C4 5μm 250mm×4.6mm 300Å  
2)检测波长: 280nm
3)柱温: 30℃
4)进样体积: 50μL
5)流速: 1.0mL/min
6)流动相: 0.1%三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脱参数见表1。



五、柱容量验证图谱



图一 肝素亲和柱1谱图




图二 肝素亲和柱2谱图


六、柱容量验证数据


表2  柱容量验证数据

七、实验结论
本文按照国标方法验证了Lubex肝素亲和柱的柱容量，回收率均＞95%，满足国标对于柱容量的要求。

囡囡很忙

感谢楼主分享 来学习一下蛋白知识喽

王中泰

囡囡很忙 发表于 2024-8-15 08:12
感谢楼主分享 来学习一下蛋白知识喽

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