各种基线问题的解决办法

王中泰

各种基线问题的解决办法

基线漂移也是高效色谱中常见的问题之一，它指的是色谱图基线在较长时间范围内的非特异性波动（如连续不断地上升和、下降或者循环），这种波动可能影响色谱峰的准确识别和定量分析。



基线漂移原因、解决方法

原因分析

① 柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）

②流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）

③流通池被污染或有气体

④检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

⑤流动相配比不当或流速变化

⑥柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

⑦流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

⑧样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰
样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

⑨使用循环溶剂，不提倡。未调整检测器。

⑩检测器没有设定在最大吸收波长处。
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解决方法

①控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

②使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用在线脱气或氦气脱气。

③用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

④取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

⑤更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

⑥用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。

⑦检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 ⑧改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

⑨重新设定基线。使用新的流动相。

⑩将波长调整至最大吸收波长处。重选检测波长。




基线波动

①气相色谱仪（FID检测器）
收集极被污染或者电路板噪音，检查收集极，或者找专业人员检查维修电路板；

色谱柱问题或者进样口被污染，重装或更换色谱柱，清洗进样口；
气体有问题，气体受到污染或者质量较差，更换气体；
检测器被污染或进样口隔垫降解，考虑清洗检测器或更换隔垫。

②液相色谱仪
泵、流动相、检测器（氘灯、流通池）等有问题：

泵：停泵，无噪音，泵头或流动相有问题，检修泵；有噪音，检测器的问题，排查检测器元件问题；

氘灯：Agilent Lab Advisor，能量测试，如果不通过，换灯，将时间清零；

流通池：Agilent Lab Advisor，测试，如果不通过，进行在线清洗；

流动相：将流通池注满水，一段时间后，若基线平稳，则流动相有问题，更换流动相；

另外，仪器在风口时，受环境影响，基线可能有出现规律的波动。

总之，在使用气相色谱仪或者液相色谱仪进行样品分析检测时，可能会遇到如上所述的色谱图问题，也会遇到其他各种各样的问题，当遇到问题时，首先应该分析可能的原因，挨个排查、解决，遇到问题并不可怕，解决问题的过程就是经验积累的过程。

基线噪音

基线噪音也称基线噪声，一般是这样规定的：它在数值上是最小检测限的二分之一或者三分之一倍。当然不同的仪器，不同的操作条件它们的基线噪声都是不一样的，当我们把谱图放大时，看到的基线上的一些小的波动，这就是基线噪声。



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基线噪音


基线噪音原因及解决办法

1、检测器/记录仪电子元件的问题
解决方法：断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

流动相脱气不完全，检测器和泵有空气

解决方法：对流动相进行脱气，当流动相脱气越好,基线就会越好。对系统进行冲洗以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液

解决方法：检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

梯度比例问题（梯度的延迟）

解决方法：对系统进行一个梯度测试,来检查梯度混合是否准确和一致。
（梯度洗脱：可以用程序控制，在不同的时间实现两种以上的流动相以不同比例混合，流动相比例发生变化极性也随之变化，对进入色谱柱不同极性的样品进行梯度式洗脱速度也发生了变化，从而实现更好的分离）

温度影响(柱温过高或检测器未加热)

解决方法：控制色谱柱和流动相的温度，在检测器前使用热交换器。

流动相或色谱柱污染、变质

解决方法：更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统；

更换系统的色谱柱。

解决方法：检查泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损；检查泵头中是否存在空气，若存在则将溶剂脱气，并重新灌注泵。

采样频率不合适

解决方法：通过理论上的计算，:N=16(T/W)^2
（N是柱效;T是保留时间;W是峰宽。）
可以根据计算结果来调整检测器合适的采样频率。

内容来源：药物分析学社  质谱学堂