霉菌的检测资料

布衣

韩国检测霉菌的方法是Howard霉菌计数法(Howard Mold Counting Assay)。其方法如下：
1.所需设备
1）高速混合器
  可调速的高速混合器，4-8个尖锐的不锈钢刃在200ml容量的不锈钢杯容器的底部附近旋转，使用旋转速度最少0~10,000rpm之间，并用带有旋转速度仪的高速混合器。

2）Howard 霉菌计数玻片（Howard Mold Counting slide）
依外壕被围绕的20×15mm大小的四角的玻璃片。试料点滴平面的两个侧面盖玻片支架比试料点滴平面高出0.1mm的整齐的突起。盖玻片放在支架上面时，使用试料点滴平面与盖玻片之间的深度达到0.1mm的玻片。
3）显微镜
使用配有4个黑白接物镜并以10-400倍的倍率可以观察的显微镜。
2.试剂
1）1%氢氧化钠溶液（NaOH）
2)氧化硅胶液小包制或者2-辛醇（2-octanol）
3)稳定液（5%果胶溶液）：高速搅拌器里注入475ml 85℃水搅拌的同时将25g的果胶（pectin）少量的添加并溶解。
3.试验操作
1）试验溶液的调配
   称5g检样放入高速混合器。100ml的 1%氢氧化钠溶液分2次添加，第一次添加约30ml在10,000rpm的速度下搅拌5秒，然后用余下的70ml清洗混合器内壁上的附着物。把混合器内的混合物以10,000rpm的速度搅拌3分钟后，滴入氧化硅胶液3~4滴除去泡沫，以上的混合物100g与25g的稳定液混合作为显微镜镜检试料。
2）试验操作
（1）显微镜镜检试料的操作

Howard霉菌计数玻片的试料平面上利用滴管点滴试料。在点滴的试料上，大的检样片或籽等用微型镊子取出后，尽量不产生斑点或线条的小心放上盖玻片，然后在显微镜载物台上插入霉菌计数玻片。
（2）霉菌菌丝的诊断
在显微镜的100~450倍观察时，霉菌菌丝有下列外观特性。
★
细胞壁的平行
   ★ 分节
  
★ 形成粒子
  
★ 分枝
  
★ 菌丝的末梢
  
★ 非折射性的外观
  （3）阳性划区的判定
对一个可视划区判定阳性或者阴性。哪一个划区也不能一次以上的判定阳性。为判定一个划区为阳性，三根以下的霉菌菌丝的总长度（合计长度）需要超过可视划区直径的1/6。大部分的阳性划区判定是包括分枝长度的一个菌丝的长度为依据，并且要超过可视划区直径的1/6。下列长度中只要有一个超过可视划区直径的1/6，该可视划区判定为阳性。

＊ 没有分枝的一个菌丝的长度

＊ 分枝的长度合计的一个菌丝的长度（总长度）

＊ 2个菌丝的长度合计的长度
＊ 3个菌丝的长度合计的长度
＊ 由霉菌块形成的所有菌丝的总长度（霉菌块是作为1个碎片来看待并且所有菌丝的总长度）
  （4）显微镜镜检
适当的调整粗调螺丝和微调螺丝，在90~125倍的倍率范围里，调准焦距到可视划区内的物体能够清晰可见。在试料平面上设定25个圆型的可视划区，按号码顺序判定霉菌菌丝体的各可视划区的霉菌菌丝体是阳性或者阴性。
从1号可视划区到25号可视划区逐一镜检，按各可视划区分别判定霉菌菌丝体的阳性或者阴性。从1号到25号划区的镜检结束后，从显微镜拿出Howard霉菌计数玻片清洗干燥。使用同一试验溶液反复（1）的试验操作，从25号划区起至1号划区逐一实施镜检，对总共50个可视划区判定阳性或者阴性。
  （5）计算
观察的所有划区镜检的结果被判定为阳性的划区的比率%。
（阳性的可视划区/镜检的总可视划区数）×100=阳性比率%

布衣

霍华德霉菌直接镜检计数法
1适用范围
本方法适用于清汁、浊汁、水、浓缩果汁中霍华德霉菌直接镜检计数。

2设备和材料
2.1烧杯
2.2玻璃棒
2.3折光仪
2.4显微镜
2.5郝氏计测玻片
3 流程
取样→称样→稀释→调节视野→涂片→观察→记录→计算  

4步骤
4.1 检样制备
  取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为1.344～1.3460（即浓度为7.9～8.8％）。用糖度计或折光仪测定折光指数或浓度，如果折光指数过大或过小，须加水或样品，直至配成标准样液，才能进行检验。
4.2标准视野的调节
  霍德华霉菌计测用的显微镜，要求物镜放大倍数为90～125倍，其视野直径的实际长度为1.382mm，则该视野为标准视野。
  检查标准视野：将载玻片放在载物台上，配片置于目镜的光栏孔上，然后观察。标准视野要具备两个条件：载玻片上相距1.382mm的两条平行线与视野相切；配片（测微器）的大方格四边也与视野相切。如果发现上述两个条件，其中有一条不符合，须经校正后再使用。
4.3 涂片
4.3.1 检查玻片
  首先用擦镜纸或绸布沾酒精将载玻片和盖玻片擦净。检查是否擦干净，可将盖盖玻片置于载玻片的两条突肩上观察盖玻片与载玻片突肩的接触处是否产生牛顿环，如果没有产生牛顿环，表明没有擦净，必须重新擦，直至产生牛顿环，方可使用。
4.3.2 加样
  用滴管或玻棒取一大滴混合均匀的样液，均匀地摊布于载玻片中央的平坦面上，盖上盖玻片（盖玻片可直接盖上去，也可以从突肩边沿处吻合切入）。  如果发现样液涂布不均匀、有气泡、或样液流入沟内、从盖玻片与突肩处流出、盖玻片与载玻片的突肩处不产生牛顿环等，应弃去不用，重新制作。  涂好的制片，在计测室内，每个标准视野的样液体积为：
    πr2×0.1＝3.1416×（1.382/2）2×0.1＝0.15mm3
4.4 观察记录
4.4.1 观察视野数及分布
  对一般样品，每个涂片均检查50个视野（每一个样品至少应测25个视野，才能代表样品的各个部分。如果检查结果阳性视野低于30％，则检查25个视野即可；如果在30～40％之间，须检查50个视野；如果在40～50％之间，须检查100个视野；如果在50％以上或超过更多，则要继续检查，直至检查25个视野的结果与一系列计算结果无差异为止）。所检查的50个视野要均匀地分布在计测室上，可用显微镜载物台上带有标尺的推进器来控制，从上到下，或从左到右一行行有规律地进行观察。
4.4.2 霉菌菌丝的鉴别  
  在同一视野内霉菌菌丝的特征是：
4.4.2.1 霉菌菌丝一般粗细均匀  
4.4.2.2 霉菌菌丝体内含有颗粒，具有一定的透明度  
4.4.2.3 有的霉菌菌丝有横隔  
4.4.2.4 有的霉菌菌丝有分支   
  当在标准视野下不能确认为霉菌菌丝时，可放大200倍或400倍上下调节视野，观察不同平面的菌丝。
4.4.3 记录结果
4.4.3.1 阳性视野与阴性视野的判断：在标准视野下，上下调节焦距发现有霉菌菌丝，其长度超过标准视野直径（1.382mm）的1/6（即一个小方格的边长）或三根菌丝总长度超过标准视野直径的1/6，这个视野称为阳性视野，否则称为阴性视野。有时在标准视野中出现极细的菌丝丛或小菌落，则以其直径来计算，超过视野直径1/6为阳性视野，否则为阴性视野。阳性视野用“＋”表示；阴性视野用“－”表示之。
4.4.3.2 对初次学习霍德华霉菌计测法者，作记录前，先在记录纸上划出计测室上50视野均匀分布的小格，观察一个标准视野，立即在相应的方格内作“＋”或“－”的记录，或“－”以空格表示之。
这种记录方法，在计测过程中，可减少重复或遗漏计数的现象，也可以从记录表格上“＋”、“－”视野的分布，了解涂片是否均匀。
如果一个样品做两个片子，观察结果误差较大（超过6％），则另取样涂片，观察测定至误差＜6％时为止。   

5结果
5.1 计算
  霍德华霉菌计测数值，又称霉菌数，用百分比表示。其含义如下：
将0.15mm3标准样液，均匀地摊布成厚0.1mm，直径为1.382mm，其面积为1.5mm2的标准视野，在显微镜下检查。按100个视野数计算，其中发现有霉菌菌丝存在的视野数（即阳性视野数）。
根据霉菌数含义，其计算公式如下：
                阳性视野数
霉菌数（％）＝                ×100％     
                    50
举例：记录的阳性视野数，片1为15，片2为16，则样品的霉菌数为：
                   （15＋16）
样品霉菌数（％）＝              ×1/2×100％＝31％
                       50   
5.2 注意事项
  部颁标准为阳性视野不超过40％，在国际贸易中，合同上无要求时按部颁标准执行，合同上有要求时按合同执行;每抽取一罐样品制两个片子，每片观察50个视野，如果超过标准指标，应该继续制片，但片子数量不得少于3片即150个视野，如果计测结果相近时，可取其平均值;如对抽样结果有异议，应加倍抽样。全部合格，作为合格处理，其中有一罐不合格，该批作为不合格处理。
5.3 报告   
  作好计测记录，按记录计算计测结果并作报告。

野兽

我看了。
韩国的方法肯定不好。
高速切碎之后，
会增加很多的霉菌菌丝片断。
这样肯定容易导致一个错误的结果。
不知道他们是否使用这样的方法检验中国的产品……

首席大弟子

那咋办哩

野兽

拍击式均质器啊！

有菌丝的微生物检验，
尽量不要使用旋转刀……

首席大弟子

我们做菌落总数和霉菌计数可都是用的一罐制哎

布衣

原帖由 野兽 于 2009-7-8 17:25 发表
我看了。
韩国的方法肯定不好。
高速切碎之后，
会增加很多的霉菌菌丝片断。
这样肯定容易导致一个错误的结果。
不知道他们是否使用这样的方法检验中国的产品……

你说对了，他们就是那样检验中国产品的

首席大弟子

你知道也不反对？

布衣

原帖由 首席大弟子 于 2009-7-9 16:24 发表
你知道也不反对？

顶风做对是必死的很惨。

竹子xj2013

这个适合检测番茄酱霉菌的检测吗？