氯霉素、磺胺类、孔雀石绿、三聚氰胺、黄曲霉毒素M1ELISA检测等大批检测试剂盒

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一、
氯霉素ELISA检测试剂盒 (美国ABRAXIS和美国Bioo Scientific产品)
试剂盒描述
MaxSignalTM氯霉素酶联免疫反应测试盒利用竞争性酶联免疫反应原理，对饲料、鱼、蜂蜜、肉类（如鸡、牛、猪肉等）、牛奶、奶粉、尿和血清等中氯霉素的残留进行定量检测。氯霉素作为光谱抗生素由于其显著的抗菌作用和药物动力学作用刚发被广泛使用于畜牧业。而用在人类会导致毒血症的副作用，导致氯霉素被禁止用于食用动物的治疗。氯霉素的残留检测可以用放射免疫、GC-MS和酶联免疫的方法来检测。酶联免疫反应（ELISA）相对更经济、快速，并且实验过程没有放射性危害。
MaxSignalTM氯霉素酶联免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测氯霉素残留的方法，该试剂盒有以下特点：
Ø
高回收率（80%以上），快速（10-40分钟之内完成提取过程）、低成本取。
Ø
高灵敏度（0.05ppb）；低检测下限（虾/鱼/肉类0.025ppb）。
Ø
检测过程只需要不到2小时。
Ø
高重复性。
试剂盒原理
MaxSignalTM氯霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有氯霉素（CPV）的抗原已经包被于微孔板上，药物分析时，样品同CAP-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有CAP,会竞争CAP抗体，抑制CAP-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中CAP的浓度成反比。
试剂盒组成部分和储存

（1）试剂盒包括：

已被抗体包被的酶标板（可拆式）
12×8 孔

标准液（0，0.05，0.15，0.5，1.5，4.5ppb）


6×1.8mL

回收用10ppb（spiking）可选




1×0.8mL

CAP—HRP耦合物




1×8mL

10×样品提取液



1×25mL

20×浓缩洗液



1×28mL

终止液

1×20mL

TMB底物


1×12mL

（2）试剂盒的保存
本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，请将CAP-HRP耦合物放置-20℃或者冰冻保存。
（3）检测下限

检测物质	检测下限（ng/g）
饲料	0.25
虾/鱼/肉	0.025
鸡蛋	0.05
奶粉	0.1
蜂蜜	0.1
牛奶	0.25
奶粉	0.1
血清	0.04
	0.5（快速提取法）
尿样	0.04
	0.05（快速提取）

（4）交叉反应：

交叉反应物质	交叉反应率（%）
氯霉素	100
氯霉素葡萄糖苷酸	76.8
氯霉素碱	< 0.5
甲砜氯霉素	< 0.05
四环素	< 0.01
庆大霉素	< 0.01
氨苄西林	< 0.01
氟苯尼考	< 0.01

4．其他需要而本试剂盒未提的设备或材料
ü
酶标仪
ü
恒温培养箱
ü
移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
ü
漩涡振荡器
ü
匀质器
ü
多道移液器（50-300mL）
ü
乙酸乙酯
ü
正乙烷
警告
实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。
ü
标准品中含有氯霉素，请小心使用。
ü
不要使用过期的试剂盒。
ü
不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
ü
尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。
ü
水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
ü
加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
ü
孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
ü
从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
ü
将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
ü
确保洗板正确，洗板充分。

MaxSignalTM Chloramphenicol ELISA Test Kit检测方法
1．试剂的准备
所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。
（1）1x工作洗液
按1：19的比例配置洗涤浓缩液和蒸馏水。
（2）1x样品提取液
按1：9的比例配置样品提取浓缩液和蒸馏水。


[ 本帖最后由 szrjkj 于 2009-12-8 08:42 编辑 ]

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硝基呋喃类ELISA检测试剂盒
1）
呋喃西林ELISA检测试剂盒

概要

硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素，有非常好的抗菌作用，曾被广泛应用为水产、禽类等的药物和促生产的饲料添加剂。但近来的科学研究表明，硝基呋喃类药物及其代谢物可以使实验动物发生癌症和基因突变，因此中国、欧盟、WHO等众多国家和组织禁止在食用动物中使用硝基呋喃类药物。硝基呋喃类药物进入动物体内后很快转为代谢物，常用检测呋喃西林残留的方法是测定代谢产物氨基脲（SEM）和邻硝基苯甲醛的衍生物（NP-SEM）。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品，与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出鱼肉、虾肉、禽肉、蜂蜜等中的呋喃西林代谢物残留。

测定原理

本试剂盒是利用免疫学竞争法的原理，在酶标板微孔上预包被有NP-SEM卵清蛋白的偶联物。检测时，加入NP-SEM标准品或待测样品溶液及特异性的抗NP-SEM抗体，包被在酶标微孔上的NP-SEM蛋白偶联物和标准品或样品中的NP-SEM竞争性地与抗体结合。再加入酶标二抗, 形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的SEM浓度与吸收光强度成反比。

试剂盒组成

酶标板1块(已包被NP-SEM卵清蛋白)

标准液×6瓶：（1ml/瓶）0、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb。

100PPb添加物
…………………1.0ml

10×浓缩抗体……………………0.8ml

10×浓缩酶结合物………………1.6ml

2×浓缩复溶液
…………………50ml

邻硝基苯甲醛……………………15mg

显色剂A …………………………7ml

显色剂B …………………………7ml

终止液
…………………………7ml

10×浓缩稀释液…………………50ml

说明书
……………………………1份

需要但试剂盒中不提供的器材和试剂

（1）设备

……微孔板酶标仪(450nm)

……天平：感量0.01g

……振荡器

……离心机

……离心管：15ml，50ml

┅┅刻度移液管：10ml

┅┅洗耳球

……微量移液器：单道20μl～200ul,,100μl~1000ul

多道20ul～200ul

……容量瓶：100ml ，1000ml

……氮吹仪或旋转蒸发仪

……恒温箱

（2）试剂

……甲醇

……氢氧化钠

……乙酸乙酯

……浓HCL

……磷酸氢二钾

……正己烷

溶液的配制

配液1：10mM的衍生化试剂

向15mg邻硝基苯甲醛中,加甲醇10ml溶解（浓度

10mM）,4℃避光保存。

配液2：0.5M K2HPO4

称114g K2HPO4·3H2O, 加蒸馏水溶解, 定容至

1L。

配液3：1M HCl

量取8.6ml浓HCl, 加蒸馏水定容至100ml。

配液4：1M NaOH

称取4g NaOH，加蒸馏水定容至100ml。

配液5：复溶工作液

用蒸馏水将2×浓缩复溶液按1：1体积比进行稀释（即1ml2×浓缩复溶液+1ml蒸馏水）用于溶解样品

配液6：洗涤工作液

用蒸馏水将10×浓缩稀释液按1：9体积比进行稀释（即1ml10×浓缩稀释液+9ml蒸馏水），用于浓缩抗体、浓缩酶结合物的稀释和酶标板的洗涤。洗涤工作液在4℃环境下可以保存一个月。

配液7：抗体工作液

用配液6将10×浓缩抗体按1：9体积比进行稀释
（即

1ml10×浓缩抗体+9ml配液6）

配液8：酶结合物工作液

用配液6将10×浓缩酶结合物按1：9体积比进行稀释

（即1ml10×浓缩抗体+9ml配液6）

样本前处理步骤

样本处理前须知

处理任何样本时，都须注意：

（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。

（3）使用复溶工作液溶解样本后须立即用于分析，不能保存。

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孔雀石绿ELISA检测试剂盒

（美国ABRAXIS和美国Bioo Scientific产品）

适用

本试剂盒适用于水产品中孔雀绿的定量检测。

原理

本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法，利用萃取剂从样品中提取到孔雀石绿. 在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品，然后加入孔雀石绿抗体，反应30分洗孔，然后加入HRP标记的孔雀石绿孵育30分后洗板，洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的孔雀石绿浓度与吸收光强度成反比 。

特异性

与孔雀石绿类似物的交叉反应

Compound %	CR
Malachite green 孔雀绿	100%
Leucomalachite 隐色孔雀绿	< 1%
Crystal Violet 结晶紫	120%
Leucocrystal Violet 隐色结晶紫	< 1%

检测限

水产品: 0.5 ppb

试剂盒组成

96孔酶标板：1块（8×12条）。
标准品贮备液（Standard）: 1瓶（0.4ml/瓶），100ppb。

酶标记物：1瓶（25倍, 0.8ml）HRP标记的孔雀石绿结合物

孔雀石绿抗体：1瓶（9ml）

底物显色液：1瓶（16ml）

标准品稀释液：1瓶（12ml）。
终止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。

结合物稀释液：1瓶（15ml）。

样本稀释缓冲液：2瓶（25ml）

浓缩洗涤液：1瓶（5倍， 100ml/瓶）、酶标板的洗涤。

使用说明书

注意

不要使用过了有效日期的孔雀石绿检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用。不使用被污染和稀释的试剂。使用前将所有的试剂拿到室温（20℃-28℃），但不要超出24小时。孔雀石绿是抗生素应小心对待。终止液为1M的盐酸避免接触皮肤，如果不小心滴到皮肤上要马上用水清洗。洗液是5乘的在使用时要稀释。

还需设备
l
去离子水或重蒸水
l
100ml或更大的量筒
l
样品提取和采集用的玻璃器皿
l
甲醇
l
25、50、100 和250μL 单道或多道移液器
l
计时器
l
旋涡混合器
l
洗瓶
l
吸水纸
l
离心机
l
450nm 滤光片的酶标仪

样品制备(肉 1:20 稀释)

1
鱼虾去皮取肉，用匀浆器均质样品，称取5g均质好的样品置于离心管中
2
加入10 mL乙腈，振荡器震荡30分

3
4000g离心10分钟

4
轻轻倒出上清, 移入到另一个离心管。

5
加入3g中性氧化铝(100-200目)。
6
3000 g 室温离心5分钟,取上清
7
移取上清液1ml于干净离心管中，氮气吹干。

8
利用样品稀释液1：10的比例稀释洗脱物，待用。

酶交联物制备

试剂盒提供的酶交联物是25倍的，每次使用前都要稀释。

标准稀释液的制备

乙腈和样品稀释液1:9的比例混合使用

标准的制备

标准品浓度（ppb）	标准品稀释液（ml）	标准品
1	4	40 uL
0.5	1	1.0ml 1ppb的标准液
0.1	1.8	0.2ml 1ppb的标准液
0.05	1	1ml 1ppb的标准液
0.025	0.5	0.5ml 0.05ppb的标准液
0.01	0.8	0.2ml 0.05ppb的标准液
0	1.000	0

操作步骤

1.
使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。装有洗液的洗瓶。
2．从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。

3. 用移液强吸取75 μl 样品处理物到对应的测试孔 ，同时在每个孔中都加入75 μl 抗体溶液。

4. 轻轻震动30秒使其混匀孵育30分。

5. 孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震荡洗涤后倒掉，重复三次，总共四次洗板。拍板，去掉残留的洗液。

6. 每个孔加入150 μL 酶标结合物.

7. 轻轻震动30秒使其混匀孵育30分

8. 孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震荡洗涤后倒掉，重复三次，总共四次洗板。拍板，去掉残留的洗液。

9. 每个孔加入150 μL 底物.孵育30分

10. 每孔加入 100 μL 终止液.

11. 450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）

结果分析

1．
半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的孔雀石绿含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的孔雀石绿含量小于此标准的浓度。
2．
定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度吸光度值的点用直线连接，样品的吸光度值也位于这条直线上，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最大标准的吸光度值或小于最小样品的吸光度值，即可说明此样品中孔雀石绿的含量小于0.01ppb或大于1ppb。

3. 当样品的浓度高于1ppb
时要调节稀释倍数来获得最终的浓度。

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0755-33939613
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磺胺类ELISA检测试剂盒

（美国ABRAXIS和美国Bioo Scientific产品）

1）磺胺嘧啶ELISA检测试剂盒

2）磺胺二甲嘧啶ELISA检测试剂盒

试剂盒描述
MaxSignalTM磺胺二甲嘧啶酶联免疫反应测试盒是用于肉类（鸡、牛和猪），肝脏，肾脏，饲料，牛奶，奶粉，血清，尿液和蜂蜜等中磺胺二甲嘧啶残留的定量检测。磺胺类药物被广泛用于食料添加剂和治疗药物。由于磺胺二甲嘧啶具有致癌性，在家禽中过量残留磺胺二甲嘧啶可能会对消费者造成危害，为此磺胺二甲嘧啶已被禁止在食品生产应用。根据美国FDA和欧盟规定，在肌肉，脂肪，肝脏、肾脏和牛奶中磺胺类药物的含量不能超过100 ng/g (ppb)。
与传统的HPLC 或GC-MS 方法相比，酶联免疫方法有操作简便、灵敏度高、成本低的优点。MaxSignalTM磺胺二甲嘧啶酶联免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的磺胺二甲嘧啶残留检测方法，该试剂盒有以下特点：
Ø
该试剂盒的专利提取方法将达到80%以上的回收率，不需用有机溶剂并在10-30分钟之内完成提取过程（而其他的方法将需1-2小时）。
Ø
高灵敏度（0.5ppb）；低定量检测下限（肉/肾脏/肝脏1.5ppb）。
Ø
检测过程只需要不到2小时。
Ø
高重复性。
试剂盒原理
MaxSignaLTM磺胺二甲嘧啶酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有磺胺二甲嘧啶的抗原已经包被于微孔板上，吸附在孔内的药物抗原与被测试的样品中药物竞争性与药物一抗相结合。当样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记的二抗相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，加酸终止反应，此时蓝色产物就会转化成黄色，在450 nm波长测定其吸收值（OD值）。OD值的大小与样品中磺胺二甲嘧啶的含量成反比。
试剂盒组成部分和储存

（1）试剂盒包括：

已包被抗原的酶标板（可拆式）....................... 12×8 孔

标准液（0，0.25，0.5，1.0，5.0，10）............... 6×0.8mL

100ppb(做添加回收用) ——可选...................... 0.8ml

磺胺二甲嘧啶一抗................................... 1×15mL

100×HRP偶联酶标记二抗体........................... 1×250uL

酶标记二抗体稀释液................................. 1×20mL

20×工作洗涤液..................................... 1×28mL

终止液............................................. 1×20mL

TMB底物............................................ 1×12mL

10×样品提取液..................................... 1×25mL

（2）试剂盒的保存

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，请将一抗和二抗放置-20℃或者冰冻保存。

（3） 样品检测下限

物质	检测下限（ng/g）
肌肉/肝脏/肾脏	0.75
牛奶	1.25
奶粉	6.25
饲料	1.0
尿液	1.25
血清	1.25
蜂蜜	5

（4） 交叉反应数据

交叉反应物质	交叉反应（%）
磺胺二甲嘧啶	100
磺胺甲基嘧啶	60
磺胺噁唑	< 2
磺胺嘧啶	< 1
磺胺吡啶	< 0.1
磺胺噻唑	< 0.1

其他需要而本试剂盒未提的设备或材料
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ü
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匀质器
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[ 本帖最后由 szrjkj 于 2009-11-30 15:04 编辑 ]

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适用

适用于定量检测水样（底下水，表面水，井水）蔬菜和水果中苄氯菊脂和相关的合成除虫菊酯。

原理

酶联免疫检测原理。测试样品和包被有合成除虫菊酯特异性抗体的磁性颗粒一起加入到一次性测试管中孵育。然后添加合成除虫菊酯酶结合物。样品中的合成除虫菊酯和合成除虫菊酯酶结合物相互竞争于磁性颗粒上的抗体结合位点。孵育，在反应中磁场应用于固定测试管中的顺磁颗粒（指结合合成除虫菊酯和酶标苄氯菊脂复合物的磁性颗粒，和它们的初始浓度成正比），同时允许把没有结合的试剂处理掉。通过添加酶底物（过氧化氢）和显色剂（TMB）可以检测到合成除虫菊酯。

品牌：ABRAXIS

规格：100次检测
精密度：%CV小于10%

敏感性：0.75 ppb

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