液相色谱仪操作注意事项

王中泰

液相色谱仪操作注意事项

液相色谱仪操作需严格遵循“流动相处理→系统平衡→规范进样→彻底冲洗”的流程，重点关注色谱柱保护和系统清洁。注意事项可分为实验前准备、操作中规范、实验后维护、色谱柱保护及安全规范五大类，具体如下：

一、实验前准备

1、流动相处理   

使用色谱纯试剂，水相需超纯水。

流动相需过滤（0.22 μm滤膜）并超声脱气15-20分钟。

含盐流动相需单独存放，避免与有机相直接混合。

2、系统检查

确认管路无漏液，压力表显示正常，泵头无气泡。

新色谱柱或长期未用的柱子需用纯有机相（如甲醇）冲洗30分钟以上平衡。

二、操作中注意事项

1、进样规范

样品确保用流动相充分溶解，否则需进行过滤（0.22 μm滤膜），避免固体颗粒进入系统。

进样前用样品液清洗进样针3次，排除气泡。

单次进样体积不超过色谱柱最大负荷（通常＜第一峰保留时间的15%）。

2、压力与流量控制

压力波动或超限时，检查管路堵塞（优先排查保护柱、单向阀、过滤器）。

流速不宜超过色谱柱最大允许值（如4.6 mm内径柱通常1 mL/min）。

3、检测器维护

紫外检测器氘灯需预热30分钟，避免频繁开关。

定期清洗流通池，防止污染导致基线噪声。

三、实验后维护

1、系统冲洗

含盐流动相实验后，先用水冲洗1小时，再用甲醇冲洗40分钟以上。

长时间停机时，色谱柱用甲醇密封保存，避免纯水导致霉菌生长。

2、关机流程

先关闭检测器光源，再关泵和工作站，最后关闭各组件电源。

泵头用10%异丙醇冲洗，防止结晶残留。

四、色谱柱保护

1、使用限制

反相柱避免强酸（pH＜2）或强碱（pH＞8）流动相，正相柱禁用含水体系。

禁止高压反冲（如C18柱不可进蛋白样品）。

2、延长寿命

加装保护柱拦截污染物。

高温使用后待柱温降至室温再关机，防止热胀冷缩损坏。

五、安全规范

化学品管理：废弃液分类处理，有机溶剂远离火源。

环境要求：实验室保持恒温（20-25℃）、干燥（湿度＜70%）、避震。